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首頁-技術文章-超微量分光光度計校準方式

超微量分光光度計校準方式

  • 更新時間2025-06-04
  • 點擊次數433
  以下是關于超微量分光光度計校準方式的詳細解析,涵蓋核心步驟、技術要點及注意事項:
  一、儀器自校準功能
  1. 原理與目的
  超微量分光光度計通常內置自校準程序,通過儀器自帶的標準參數(如暗電流校正、光源強度補償)對光學系統進行初始化標定。自校準可快速修正電子漂移、光源老化等引起的偏差,是日常維護的基礎步驟。
  2. 操作步驟
  - 進入儀器菜單,選擇“自校準”或“性能驗證”模式;
  - 按提示執行空白測量(如空氣或純水作為參比);
  - 儀器自動調整至出廠預設參數,并生成校準報告。
  3. 局限性
  自校準無法糾正波長偏移或光路物理變化(如光纖位移),需結合其他方法定期驗證。
  二、外部標準溶液校準
  1. 適用場景
  當儀器用于定量分析(如核酸、蛋白濃度測定)時,需通過標準溶液驗證吸光度準確性。常用標準物質包括:
  - 霍姆斯緩沖液(Horseradish Peroxidase, HRP):用于紫外區(230 nm、260 nm、280 nm)校準;
  - 中性密度濾光片:驗證吸光度線性范圍(0-4 OD);
  - NIST追溯標準溶液(如重鉻酸鉀溶液):用于多波長交叉驗證。
  2. 操作要點
  - 液柱形成:超微量儀依賴基座檢測模式,需用移液槍精確滴加0.3-2 μL標準液,形成穩定液柱(光程0.05-0.5 mm);
  - 多點校準:在目標波長(如260 nm測RNA)下測量不同濃度標準品,繪制標準曲線,計算儀器線性相關系數(R²>0.995為合格);
  - 空白對照:使用同批次溶劑(如超純水)作為參比,避免溶劑雜質干擾。
  三、波長校準
  1. 必要性
  波長準確性直接影響定性分析(如特征吸收峰識別)。超微量儀的氙燈光源或LED光源可能發生波長漂移,需定期校驗。
  2. 校準方法
  - 汞燈特征譜線法:利用汞燈在253.6 nm、296.7 nm等處的尖銳吸收峰,對比儀器顯示波長與實際峰值偏差(應<±1 nm);
  - Horia溶液法:通過鈥玻璃在可見光區的多條特征吸收峰(如486 nm、536 nm)進行多點校準;
  - 軟件校準:部分機型支持自動掃描標準濾光片,通過算法修正波長偏移。
  四、穩定性與重復性檢測
  1. 短期穩定性
  - 連續測量同一標準樣品(如1 mg/mL BSA溶液)至少6次,記錄吸光度值(如280 nm下誤差應<±0.005 OD);
  - 檢查基線噪聲(通常要求<0.002 OD)以評估光路穩定性。
  2. 長期穩定性
  - 每月進行一次全波長范圍(200-1000 nm)的基線掃描,觀察雜散光和波長重復性;
  - 使用標準溶液周期性驗證(如每周一次),記錄偏差趨勢。
  五、特殊注意事項
  1. 基座清潔與維護
  - 每次使用后用拭鏡紙擦拭基座,防止殘留蛋白或鹽結晶影響液柱形成;
  - 定期檢查光纖探頭是否磨損,避免光損失。
  2. 環境控制
  - 實驗室溫度需控制在20-25℃,濕度<60%,避免冷凝水干擾光學系統;
  - 避開強電磁場(如離心機、微波爐),防止信號噪聲。
  3. 溯源性與合規性
  - 校準標準物質需具備NIST或ISO認證,確保量值傳遞可靠性;
  - 若用于臨床診斷或質檢,需符合行業規范(如CLSI標準或藥典要求)。

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